乳糜微粒是人血浆中最大的脂蛋白颗粒,CM是多数膳食TG从小肠吸收部位输送至体循环。CM清除速度快,半衰期为10min,正常人空腹12h后不能检出,脂蛋白电泳时CM位于原点。需注意的是做血清脂蛋白电泳时样品应新鲜,不可冻存。
阴性。
阳性:高脂蛋白血症Ⅰ型、高脂蛋白血症Ⅴ型。
(1) 免疫透射比浊法:
① 关于抗血清:比浊测定与其他方法相比对抗血清的要求更高。比浊法以用多克隆抗体为宜。抗血清中必须不含杂抗体。必须十分重视从人血清中提取的apoA-Ⅰ达到免疫纯、色谱纯与电泳纯,这不是一般实验室都能做到的。抗血清效价(滴度)不可低于16。目前国内某些商品试剂中,apoA-Ⅰ抗血清效价极低,选购试剂盒时必须注意。如果没有在选购前鉴定抗血清质量的经验,应请有条件的单位鉴定之。
② 上法中标本(血清)稀释200倍是为了便于手工操作(加样100μl),如有精密加样器,可作20倍稀释(用10μl)。为了适合不同实验室的条件(如不同类型的自动化仪器),作适当修改时应注意抗原抗体的比例,必须十分注意反应体系中不可有抗原过量,线性上限不可低于2.5g/L。换言之,抗血清用量必须充裕,否则标本中apoA-Ⅰ高水平时测出结果偏低。目前国内某些商品试剂盒不但抗血清效价过低,操作中所定标本用量又过大(如3-5μl),抗体明显不足,测出结果必然不准确。
③ 为了达到准确测定的目的,apoA-Ⅰ与B比浊测定(终点法)中必须作校准曲线计算结果。一定范围(低标本用量)浓度(X)与浊度(Y)基本上成直线关系,直线回归计算出在Y轴上有一定截距(A值<0.1),所以用单点校准计算结果偏差较大,使测出结果不能准确反映浓度的高低(高的偏低,低的偏高)。千万不要因为单点法简便而忽略了测定的准确性。无论用何种自动化仪器,必须先试作校准曲线。如果在所用仪器及特定条件下反复测试,回归线的截距不明显时,才能采用单点校准法。标本用量在3-5μl时,即使加大抗血清用量,浓度与浊度也不成直线关系,只能用曲线直线化转换后计算。
④ 主要干扰因素是血清本身的混浊(如高脂血清),用超离心或脂肪酶水解等标本预处理方法都不实用。用表面活性剂消浊的作用也有限,所以在测定中必须作标本空白管。除了自动分析中可采用两点法外,手工法用单一试剂而不扣除标本空白的做法是错误的。为了减少基质效应对浊度反应的影响,必须用定值血清作校准物。此外,尘埃粒子、比浊皿划痕等干扰也必须排除。
⑤ 有的商品试剂盒(包括某些进口产品)所附校准血清定值不准确,是误差的重要来源。
(2) 火箭电泳法:
① 抗原稀释倍数与抗血清用量的选择,应以火箭峰清晰、校准曲线斜率适中并成直线为宜。本法同时测定apoA-Ⅰ与apoB,应调整两种抗血清用量,使二者峰高有区别,apoB峰高不小于1cm。
② 不同种类来源的抗血清(如兔与羊),在等效价的情况下进行试验,结果会有差异。apoA-Ⅰ测定以兔抗血清为好。用兔血清时峰形尖细,而羊血清所产生的峰粗,峰尖圆钝,有时在峰顶前出现虚影。校准血清所作校准曲线斜率也不同。但不论用何种抗血清,定量结果差别不大。
③ 在一定条件下电泳,不同稀释度校准血清的峰高不会有明显变动,校准曲线斜率基本一致。如标本峰高超出校准曲线范围时,应调整标本稀释倍数后重测。板间CV通常小于5%。
④ 火箭电泳结果可以用染色法或直接肉眼观察可见的火箭峰。前者用标本少,节省抗血清,但如适当增加标本及抗血清用量,不染色更为方便。所用琼脂糖应为标准电渗或低电渗的,凝胶中加入适量葡聚糖或聚乙二醇可使火箭峰更清晰。
⑤ 火箭峰的测量可以计算面积或峰高,面积是峰高乘以峰宽(峰半高处的宽度)。测量精度最好能达0.1mm。须用机械或电子放大设备。标准曲线范围内峰高以1-4cm为宜。
⑥ 本法适用于少量标本分析。也适用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp(a)测定。
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高脂蛋白血症Ⅴ型,高脂蛋白血症Ⅰ型