各种血红蛋白的等电点不同的特点,在一定pH缓冲液中所带的正、负电荷不同,经电泳后各血红蛋白的移动方向不同。
电泳法: HbA95%、HbA21.1%-3.2%、HbA32%-3%。
Singer法:HbF<4%。
(1) HbA2升高,可见于维生素B12或叶酸缺乏所致的巨细胞贫血、部分轻型珠蛋白生成障碍性贫血。
(2) HbA2降低:见于缺铁性贫血。
(3) HbF升高:可见于纯合子β珠蛋白生成障碍性贫血、杂合子β珠蛋白生成障碍性贫血和正常新生儿。
(4) 其他:
① 主要成分为HbS,而无HbB,可见于镰形细胞血红蛋白病。
② HbS、HbF和HbA2轻度增加,而HbA极少或消失,结合调查可诊断为HbS-β-海洋性贫血,多见于地中海地区。
③ 除HbS外,含有10%-30%HbA和轻度增高的HbF及HbA2,也可考虑HbS-β-海洋性贫血。
④ HbS占20%-30%,HbA占65%-75%,并含有正常的HbF和HbA2,可诊断为HbS-α-海洋性贫血。
⑥ HbA消失,HbC占总血红蛋白的28%-44%,可诊断为血红蛋白病,多见于黑人,血片中可见较多的靶形细胞。
⑦ 有HbS,还出现HbD,血片中有靶形细胞,可诊断为血红蛋白D病,我国北方较多见。
⑧ 电泳结果出现HbE,可诊断为血红蛋白E病,主要见于东南亚、印度等,我国以广东南部多见。
蜡酸纤维薄膜电泳直接比色法
试剂:同醋酸纤维素膜微量血红蛋白电泳。
操作:
(1)将醋酸纤维素膜作1/3切开(4cm×8cm)漫于TEB缓冲液中,10min以上。
(2)取出醋酸纤维素膜用滤纸吸去多余的水份。以Hb吸管吸取100g/L溶血液10μl均匀涂于玻璃推片下缘,在距薄膜阴极端1.5-2.0cm处于无光泽面点样。每个标本同时做两份。
(3)电泳:缓冲液同微量血红蛋白电泳。电压180V,时间40min-1h。(以各区带明显分开为宣)电泳后交换电极,缓冲液可反复使用。
(4)洗脱与定量 分别剪下HbA,HbA2和相当于HbA2大小的对照区带。如有异常Hb区带(HbX)也同时剪下,各自放在相应的试管中。于HbA管中加TEB缓冲液10ml,其余各管加TEB缓冲液2ml,浸泡30min,时时振摇。待完全洗脱后。将
洗脱液混匀,用721分光光度计,波长413nm。以空白调零,测各管吸光度。
(5)计算:
如有异常HbX,则计算HbA2%时,分母中还要加:HbX吸光度。
HbX%=
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