组成脂蛋白的特殊蛋白称为Apo。Apo是决定脂蛋白性质的主要蛋白成分。在不同的脂蛋白中,Apo的种类、含量和功能也不同。Apo的主要功能有:①构成脂蛋白,使血浆脂质成为可溶性。②激活或抑制脂蛋白代谢有关的酶。③识别脂蛋白受体,与特异性脂蛋白受体结合。④结合和转运脂质,稳定脂蛋白结构等。
(1)单向免疫扩散法:未测出ApoB100、CⅡ,而ApoCⅢ含量极微;ApoA1为0.01±0.0054g/L,ApoE为0.0069±0.0016g/L与22.2%。
(2)火箭免疫电泳法:ApoA1 0.04±0.01g/L。
(3)ELISA法:ApoE 0.008±0.001g/L。。
脑脊液中载脂蛋白含量远低于血液水平,免疫组化试验证明大脑额叶的星形胶质细胞及某些神经元能合成ApoE,而CSF中的ApoA1与ApoCⅡ可能从血中渗入。但当患神经系统疾病时,可致血脑屏障功能受到损害。使其通透性增高,血液中ApoA1可更多渗入CSF中,ApoA1含量增加;因ApoB100分子量大不能透过,故脑膜炎、脑血管病,脑囊虫患者ApoA1、ApoE在CSF中的水平均升高。载脂蛋白的测定可为诊断某些神经系统病提供有价值的信息。
(1)LP(a)颗粒中apo(a)与apoB以二硫键相联结;apo(a)的氨基酸组成与PMG有高度同源性,故用LP(a)给动物免疫所得抗血清(多克隆抗体)中同时有抗apoB与PMG抗体,通常用亲和层析法纯化,不易获得纯apo(a)抗体。但用杂交瘤技术制备的McAb可以避免与apoB及PMG的交叉反应。
(2)为了避免孔间差异,减少误差,同一标本最好平行做2-3份,取平均值。
(3)应严格掌握稀释的精密度,由于血清LP(a)水平可小于10mg/L或高达1000mg/L以上,对过高过低的标本应调整稀释倍数后重新测定。
(4)包被抗体与酶标抗体不可反复冰冻融化,稀释/封闭液及底物液应新鲜配制。空白吸光度增高可能由于底物溶液陈旧或封闭不充分。
(5)本法批内CV<5%,批间CV<9%。实验误差来源有板间差、孔间差、稀释及加样误差、试剂质量及孵育时间等。
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