B淋巴细胞与抗体合成有关,是体液免疫反应的效应细胞。B细胞表面带有膜表面免疫球蛋白(SmIg)、Fc受体及补体受体等。它可与抗原抗体复合物的Fc段牢固结合。选用鸡或羊红细胞,用相应的抗红细胞抗体致敏成EA复合物,B细胞的Fc受体能与EA结合形成花环,称EA花环。如果EA复合物再加上补体,与B细胞的补体受体结合,则形成EAC花环。B细胞表面有鼠RBC受体,能与小鼠RBC结合,形成鼠红细胞花环(M-RFC),主要结合于带有IgM受体的B细胞上,形成M-RFC的多为幼稚B细胞。本试验临床上主要用于检测B淋巴细胞的数量及判断体液免疫水平。
结果:镜下计数200个淋巴细胞,凡吸附3个或3个以上小鼠红细胞的淋巴细胞为B淋巴细胞,计算出小鼠细胞花环(ME花环)的百分率。正常人外周血ME花环百分率为5%-10%。
慢性淋巴细胞白血病患者外周血液的ME花环百分率高达60%-80%,而无丙种球蛋白血症、严重联合型免疫缺陷等,ME花环百分率减低或缺如。
(1)温育时间:ME花环百分率随温育时间延长而逐渐增加,温育1h,ME百分率为7.4±3.1%,而温育18h,增至18.3±3.8%,温育72h后,花环数又逐渐降至3.4±7.1%。
(2)培养液:以用Tc199培养液最为适宜,其结果及重复性均好。用Hepes缓冲的RPMl 1640培养液洗涤和重悬淋巴细胞和红细胞,导致细胞趋向聚集,而形成大块细胞,从而产生不可靠的结果。
(3)红细胞与淋巴细胞的最适比例约为35∶1,比例>60∶1,或比例<25∶1时,ME花环数可减低。
(4)保存MRBC的培养液:在Alsever液中,MRBC 4℃保存1周仍可产生稳定的花环数,而在PBS,生理盐水或Tc199培养液中保存的MRBC,随着保存时间延长,花环数逐渐下降,保存72h后,只能看到小数花环或无花环形成细胞。
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