外科手术治疗的成败和手术中的无菌操作有密切关系。正确掌握无菌技术是预防切口感染，保证病人安全的关键。
在手术过程中，虽然器械和物品都已灭菌、消毒，手术人员也已洗手、消毒，穿戴无菌手术衣和手套，手术区又已消毒和铺无菌布单，为手术提供了一个无菌操作环境。但是，还需要一定的无菌操作规则来保证已灭菌和消毒的物品或手术区域免受污染，手术进行中的无菌原则包括：
1．手术人员穿无菌手术衣后应避免受到污染，手术衣的无菌范围是腋前线颈部以下至腰部及手部至肘关节以上5cm。手术台边缘以下的布单均属有菌区域，不可用手接触。 手术人员在穿好手术衣后，前臂不应下垂，应保持在腰平面以上。双手不应接近面部或交叉及放于腋下，应肘部内收，靠近身体。手术人员倚墙而立或靠坐在未经灭菌的地方，均是违反无菌原则的。
2．减少空气污染、保持空气净化效果。手术室门窗应关闭，人员尽量减少在手术间内走动，避免引起阵风。手术进行中应保持肃静，避免不必要的谈话。咳嗽、打喷嚏时应将头转离无菌区，避免飞沫污染。
3．非洗手人员不可接触已消毒灭菌的物品。
4．洗手人员面对面，面向消毒的手术区域，只能接触已消毒的物品。
5．如怀疑消毒物品受到污染应重新消毒后再使用。
6．无菌布单如已被浸湿，应及时更换或盖上新的布单，否则可将细菌从有菌区域带到消毒物的表面。
7．不可在手术人员背后传递器械及手术用品，手术人员也不要伸手自取。坠落到手术台平面以下器械物品不准捡回再用。
8．手术过程中术者出汗较多时，应将头偏向于一侧，由其他人代为擦去，以免汗液落于手术区内。
9．接触无菌区时，必须经过手臂灭菌、穿无菌衣及戴无菌手套。巡回护士取用无菌物品要用无菌持物钳夹取，并应与无菌物、无菌区保持一定的距离(约35cm)，避免衣袖、衣服接触无菌物及跨越无菌区，倾倒溶液时只许瓶口进入无菌区的边缘。
10．如手套破损或接触到有菌的地方，应另换无菌手套。前臂或肘部碰触有菌地方，应更换无菌手术衣或加套无菌袖套，污染范围极小的也可贴上无菌胶膜。
11．在手术过程中如因手术需要移动，应面向无菌区。与另一手术人员换位时，应先退后一步，转过身，背对背地转到另一位置上。在经过穿手术衣人员面前时，应互相让开，以免碰撞污染。
12．作皮肤切口及缝合皮肤之前，需消毒皮肤。切开空腔脏器之前，应先用纱布垫保护周围组织，以防止或减少污染。
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